单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于表面抗原种群特异形、寡核苷酸体现成本预算昂贵或方法过程多样化。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯博士生导师专业团体在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低总成本、跨植物物种、全游戏平台兼容的全新解决方案。

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Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由中华国小学科学技术性院基因显性基因性规律与阴茎发育动物学探析所和中华国基因显性基因性规律深入分析会主办者的国.际学界深入分析杂志刊物，锐意创新于曝光人生小学科学技术性和医美基因显性基因性规律学业务前沿技术的原创网性探析科研成果。JGG 2021年度影向细胞因子7.1，Scopus学界深入分析杂志刊物口碑技术指标CiteScore 9.9，跃居JCR 2021年度GENETICS & HEREDITY业务前沿技术Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY业务前沿技术Q1区，跃居中华国小学科学技术性院杂志刊物分区域动物学类别1区(Top杂志刊物)，基因显性基因性规律学和生化模式与氧分子动物学小类双1区。

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哪些是HEATag

恰当的“二合二为一”开发

HEATag是由凝集素和HUH内切酶造成的重构核蛋白

「手机定位器」功能模块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化装饰（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「联接器」模块图片 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）字段条型码实行共价对接。

“1+1>2”的特效：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行范本标注与可追溯。

Fig1: HEATag多种标志的基本原理关心图

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实际的定期检查

HEATag究竟 有能开打？

能能在各种不同经济条件下，实行蒲乳期食草动物人体组织系单人体组织混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。钻研队伍为 HEATag 设有了多轮 “压差试验”，从神经内部系到神经内部核，从恒温到高温，从新鲜模本到固定住模本，全东南方向认证它的不稳判定性和牢靠性。

独一场测评面对喂母乳动物界体细胞膜系系：论述人员管理选定 了存在人、鼠、仓鼠两个种类的四种方式体细胞膜系（HEK293T、K562、MEF、CHO），在在常温使用 HEATag 标签后混合法测序。结果是收售的 11447 个体细胞膜系中，85.66% 都能能够 HEATag 长条码为准相匹配到原种类，范本间穿插水污染较少，UMAP 聚类介绍介绍这是马上证明文件，HEATag 长条码与种类特男人染色体组结构特征长度相符。 然后接着，检验能力进一大步晋级：科学研究的人员再试一次在 4℃下标志新鲜度的内部核膜、在温度下标志甲醇比较规定内部核膜，以及马上标志内部核膜核。毕竟还醒目：一切能力下，样板标价签与种类个人信息均具备有特好的涉及到的性，拆成精确度率超 95%。纵使甲醇比较规定会从而导致偶尔的转录本交叉的情况污染源，内部核膜核分离纯化就有极少量 RNA 外流，内部核膜形式的参考文献标注毕竟还与新鲜度的样板维持同步，验证 HEATag 也可以标志区别整理能力下的工作样板。

Fig2: HEATag 可在不一样的前提下完全单细胞膜转录组混样研究分析

会标注喂母乳甲壳昆虫和海洋环境无脊椎骨甲壳昆虫的原代内部

只要说癌细胞核系测验是 “基本条件题”，那组织机构样板可以说是 “扣减题”， 哪些样板通常因癌细胞核性质麻烦、条件适用于性特定，成了图标工艺的 “困惑”，而 HEATag 恰恰舞在哪些 “困惑” 上表现了优劣势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸机构，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不光能被精确度分辨，各种重点细胞系的类型的聚类分析法结局都明白可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海域生物工程的支持性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 方形码与植物物种转录组享有较高高度性，不存在展现因高盐情况使得的 “标出无效”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可满足辅乳猎物组织化样本量多方面 scRNA-seq 阐述

Fig4: HEATag可完成新鲜毛肚海洋能无脊柱绿色几吨 scRNA-seq 解析

HEATag与组织的整合不要给予转录组的可观转变

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在完工图标任務的一并，是不会对之后的转录类物质析容易造成干预，做到了深入分析动态数据的现实性。

Fig5: HEATag是不会直接影响模本的 RNA 呈现方法

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未来的发展可期

HEATag 能为单生殖细胞学习造成甚么？

HEATag 的價值，远不至于 “搞定标出状况”，它的灵活多变性和普遍性，目前在为单内部研发点开越多可能会性

从操作3d场景了解

HEATag 能遮盖从 “简洁明了非常分析一下”（如癌企业与健康企业、用药进行处理与差表）到 “大占比探析”（如企业上皮细胞核图谱绘制图、mtk量意愿）的全领域意愿。伴随着 PIP-seq、Stereo-cell 等创新型可优化新技术的未来发展，HEATag 还能进两步提高自己单上皮细胞核探析的通量，助力器科研开发开发团队深入推进大占比的好项目。

从跨的领域优势来

HEATag 这样不仅采在转录组学，还能与表观染色体组学、球高蛋白组学、室内空间组学等科技工艺整合，完成自定义引索和寡核苷酸队列，HEATag 行轻轻松松加上有差异的组学流程图，不导致移动信号捉捕淬硬层。同時，通过HEATag还行开发单体细胞糖组学实验科技工艺。

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战略合作动态数据

拜谱怪物与陈凯传授获得首次合作方式意向书

值不值得私信的是，在 HEATag 技木展现什么出巨型使用潜力股的背景图片下，拜谱动物已与前力地区海上能数学与项目工程前力测试室（杭州）陈凯专家形成进行战略合作购房意向。买卖双方项目贯穿 HEATag 技木的工业化半空、科技项目转换成等的方向呈现厚度操作，促进推动此种低利润、跨种群的单神经血细胞核标上技木迅速使用于预期科技项目消费场景，为很多测试室带来高效、性价比最高、经济能力的单神经血细胞核研究探讨的工具，力助科技项目运我们在神经血细胞核动物学、海上能动物学、皮肤疾病共识机制等方向要先拿到很多推动